RB1 – ген-супрессор опухолевого роста, расположенный на хромосоме 13q14. Он кодирует белок ретинобластомы (pRb) – ключевой регулятор клеточного цикла. В норме pRb сдерживает деление клеток, блокируя переход из фазы G1 в фазу S клеточного цикла. При инактивации обеих копий гена RB1 этот контроль утрачивается, и клетка приобретает способность к неограниченному делению.

Делеция гена RB1 – утрата части или всего генетического материала в локусе 13q14 – является одним из механизмов инактивации этого гена. Делеции могут быть крупными (захватывать несколько мегабаз и соседние гены) или малыми (в пределах одного экзона). Согласно классической концепции Кнудсона «двух ударов», для развития опухоли необходима инактивация обоих аллелей RB1: первый «удар» может быть унаследован или приобретён в соматической клетке, второй – всегда соматический. При наследственных формах ретинобластомы первая мутация присутствует во всех клетках организма с момента рождения, что объясняет более ранний возраст манифестации и высокую частоту двусторонних опухолей.

Клиническое значение выявления делеции гена RB1

Первичное клиническое значение делеций RB1 связано с ретинобластомой – злокачественной опухолью сетчатки, наиболее часто встречающейся у детей до 5 лет. Около 40% случаев ретинобластомы обусловлены наследственными мутациями RB1, передающимися по аутосомно-доминантному типу. Выявление делеции у ребёнка с ретинобластомой позволяет установить наследственную природу заболевания.

Помимо ретинобластомы, соматические делеции и другие инактивирующие изменения RB1 обнаруживаются при широком круге злокачественных опухолей: остеосаркоме, мелкоклеточном раке лёгкого, раке молочной железы, мочевого пузыря и предстательной железы, а также при ряде гематологических опухолей – в частности, при хронической лимфоцитарной лейкемии (ХЛЛ), где делеция 13q14 является наиболее частой хромосомной аберрацией и встречается примерно у 50% пациентов. При ХЛЛ изолированная делеция 13q14 ассоциирована с относительно благоприятным прогнозом, тогда как её сочетание с другими аберрациями (del17p, del11q) указывает на более агрессивное течение.

Показания для анализа на делецию гена RB1

• Диагностика ретинобластомы у детей – для подтверждения диагноза и разграничения наследственной и ненаследственной форм.
• Семейный анамнез ретинобластомы.
• Пренатальная и преимплантационная генетическая диагностика при известной мутации RB1 в семье.
• Диагностика хронической лимфоцитарной лейкемии – делеция 13q14 входит в стандартную цитогенетическую панель при ХЛЛ.
• Оценка прогноза и выбор тактики лечения при ХЛЛ и других гематологических опухолях.
• Молекулярно-генетическая характеристика остеосаркомы, мелкоклеточного рака лёгкого и других солидных опухолей в рамках комплексного молекулярного профилирования.
• Мониторинг минимальной остаточной болезни при ХЛЛ в динамике на фоне лечения.

Методы выявления делеции гена RB1

Молекулярно-генетические методы

Секвенирование нового поколения (NGS) и хромосомный микроматричный анализ (ХМА/CGH-array) обеспечивают высокое разрешение при выявлении делеций любого размера – от крупных хромосомных до субэкзонных. NGS-панели позволяют одновременно анализировать все экзоны RB1 и выявлять как делеции, так и точковые мутации и изменения числа копий. ХМА особенно эффективен при подозрении на протяжённые делеции, захватывающие соседние гены.

Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH)

FISH – метод визуализации хромосомных аберраций с помощью флуоресцентно меченных ДНК-зондов, специфичных к локусу 13q14. Метод применяется преимущественно при гематологических опухолях (ХЛЛ, множественная миелома) на интерфазных ядрах клеток костного мозга или крови. FISH позволяет выявить делецию в отдельных клетках опухолевого клона, оценить долю клеток с аберрацией и провести мониторинг в динамике. 

ПЦР-основанные методы

Количественная ПЦР (qPCR) и мультиплексная амплификация лигированных зондов (MLPA) используются для определения числа копий отдельных экзонов гена RB1. MLPA особенно эффективна при поиске интрагенных делеций и дупликаций у пациентов с ретинобластомой: метод одновременно анализирует все 27 экзонов гена и позволяет точно картировать границы делеции. 

Подготовка к сдаче анализа

Специальной подготовки не требуется. 

Как интерпретируются результаты анализа

Результат выдаётся в виде заключения молекулярного генетика с описанием выявленных или не выявленных аберраций в локусе RB1.

• Делеция выявлена: указывается её тип (гетерозиготная или гомозиготная), размер и локализация (конкретные экзоны при MLPA, цитогенетические координаты при FISH или ХМА). 
• Делеция не выявлена: отрицательный результат не исключает наличия других инактивирующих изменений RB1 – точковых мутаций, сплайсинговых вариантов или эпигенетической инактивации (метилирование промотора). При клиническом подозрении на наследственную форму ретинобластомы отрицательный результат MLPA требует дополнительного полного секвенирования гена.

Риски и ограничения метода

Мозаичные делеции – когда аберрация присутствует лишь в части клеток – представляют особую диагностическую сложность и требуют применения высокочувствительных методов с глубоким секвенированием. Интерпретация вариантов неопределённого значения требует привлечения специализированного генетика.

Роль анализа в выборе тактики лечения

При ретинобластоме установление наследственной делеции RB1 влечёт пожизненный мониторинг парного глаза и повышенную онкологическую настороженность в отношении вторичных опухолей (остеосаркома, мягкотканные саркомы). При ХЛЛ наличие изолированной делеции 13q14 при отсутствии других неблагоприятных аберраций позволяет придерживаться тактики наблюдения без немедленного начала терапии. Молекулярный профиль опухоли, включающий статус RB1, учитывается при выборе режима таргетной терапии при ряде солидных опухолей.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Обухова Т.Н., Кислова М.И., Никитин Е.А. и др. Структура и прогностическое значение делеции 13q14 при хроническом лимфолейкозе. Гематология и трансфузиология. 2022; 67(2): 183–197. 
2. Хронический лимфоцитарный лейкоз / лимфома из малых лимфоцитов. Клинические рекомендации. М.: Национальное гематологическое общество, Российское общество онкогематологов; 2021.
3. Поляков В.Г., Ушакова Т.Л., Горовцова О.В. и др. Ретинобластома: клинические рекомендации по диагностике и лечению. Онкопедиатрия. 2017; 4(1): 12–34. 
4. Lohmann D.R., Gallie B.L. Retinoblastoma. In: Adam M.P. et al. (eds.) GeneReviews. Seattle: University of Washington; 2000 (updated 2018). PMID: 20301625
5. Rushlow D.E., Mol B.M., Kennett J.Y. et al. Characterisation of retinoblastomas without RB1 mutations: genomic, gene expression, and clinical studies. The Lancet Oncology. 2013; 14(4): 327–334. 
6. Dohner H., Stilgenbauer S., Benner A. et al. Genomic aberrations and survival in chronic lymphocytic leukemia. New England Journal of Medicine. 2000; 343(26): 1910–1916.