Мастоцитоз относят к группе редких гетерогенных заболеваний, в основе которых аномальная инфильтрация неопластических тучных клеток в один или несколько органов. На основании клинической картины мастоцитоз можно разделить на две основные формы: кожную и системную. Мастоцитоз поражает как детей, так и взрослых и в основном является приобретенным, хотя были зарегистрированы редкие семейные случаи. У детей заболевание в первую очередь ограничивается кожей и в основном регрессирует в подростковом возрасте. Напротив, у взрослых заболевание может быть хроническим, неизменно поражая костный мозг. У взрослых пациентов может проявляться вялотекущая форма заболевания или присутствовать более агрессивная форма или даже прогрессировать до развития лейкозных вариантов с аномальным накоплением тучных клеток в различных тканях; в первую очередь в коже, костном мозге и висцеральных органах, что приводит к полиорганной недостаточности и сокращению продолжительности жизни.

Определение мутации D816V в гене KIT имеет важное значение в гематологии и онкологии, прежде всего для диагностики заболеваний, связанных с патологическим ростом тучных клеток и аномальной активацией сигнальных путей.

Показания для анализа

Анализ мутации D816V в гене KIT рекомендуется в следующих случаях:

• Подозрение на системный мастоцитоз. Исследование назначается при наличии характерных клинических проявлений: частые кожные высыпания, зуд, анафилактоидные реакции, боли в костях, нарушения со стороны ЖКТ.
• Дифференциальная диагностика форм мастоцитоза. Анализ позволяет уточнить, идёт ли речь о кожной форме заболевания или о системном процессе, затрагивающем костный мозг и внутренние органы.
• Гематологические заболевания. Мутация D816V может выявляться при некоторых миелопролиферативных и миелодиспластических синдромах, острых миелоидных лейкозах.
• Мониторинг пациентов. Тест применяется для уточнения прогноза, выбора терапии и контроля за эффективностью лечения, в том числе при применении таргетных препаратов.

Подготовка к исследованию

Кровь необходимо сдавать натощак, лучше до 11:00 утра. Биоматериал – венозная кровь.

Что показывает анализ?

Исследование крови на изменения D816V в KIT методом ПЦР показывает, есть ли у пациента генетическое изменение, связанное с неконтролируемым ростом тучных клеток. Обнаружение этой мутации является важным диагностическим критерием системного мастоцитоза и некоторых других заболеваний кроветворной системы.

Метод ПЦР позволяет выявить даже небольшое количество изменённых клеток, что делает исследование высокочувствительным.

Нормы и расшифровка результатов

Мутация D816V в гене KIT выявляется у большинства больных системным мастоцитозом и рассматривается как важный молекулярный диагностический маркер заболевания. В норме мутация отсутствует. Ее выявление указывает на злокачественный процесс в тучных клетках. Результат «не обнаружена» означает отсутствие мутации и низкий риск мастоцитоза. Положительный результат требует консультации гематолога и может указывать на резистентность опухоли к терапии иматинибом. Анализ важен для диагностики, выбора и коррекции лечения.

Какую функцию выполняет ген KIT и какой белок он кодирует?

Ген KIT, расположенный на 4-й хромосоме, кодирует белок-рецептор KIT (CD117) – трансмембранный рецептор с тирозинкиназной активностью. Этот белок играет ключевую роль в регуляции роста, дифференцировки и выживания клеток. KIT-рецептор экспрессируется на поверхности множества клеток организма, включая кроветворные клетки-предшественники, тучные клетки, меланоциты и клетки половых желёз. Его естественным лигандом является фактор стволовых клеток (Stem Cell Factor, SCF). При связывании с SCF рецептор активируется и инициирует внутриклеточные сигнальные каскады, управляющие делением, миграцией и развитием клеток.

Благодаря этой функции KIT участвует в формировании кроветворной системы, нормальной работе иммунитета и развитии тканей. Например, активация KIT необходима для образования эритроцитов, функционирования тучных клеток и поддержания репродуктивной системы.

Мутации в гене KIT, в том числе замена D816V, приводят к тому, что рецептор становится активным без участия лиганда. Это вызывает постоянный сигнал к росту и делению клеток, что может приводить к их накоплению и развитию заболеваний – от системного мастоцитоза до некоторых форм лейкозов и опухолей.

При каких заболеваниях наиболее часто выявляется мутация KIT D816V?

Мутация KIT D816V наиболее часто выявляется при системном мастоцитозе (СМ) – заболевании, связанном с избыточным размножением патологических тучных клеток. Эта мутация обнаруживается у более чем 80-90% взрослых пациентов с СМ и является ключевым диагностическим маркером. Кроме того, мутация KIT D816V встречается при некоторых миелоидных неоплазиях, включая острый миелоидный лейкоз, миелодиспластический синдром и миелопролиферативные заболевания.

Также мутации KIT наблюдаются в гастроинтестинальных стромальных опухолях (ГИСО), где они играют роль в опухолевой прогрессии и ответе на терапию. В редких случаях мутация связана с наследственными пигментными нарушениями кожи, сопровождающимися мастоцитозом и стромальными опухолями.

Какие методы применяются для выявления мутации KIT D816V?

1. ПЦР с аллель-специфичными праймерами (ASO-PCR). Самый распространённый метод. Позволяет быстро и точно определить наличие мутации, даже если изменённых клеток немного.
2. Цифровая ПЦР (ddPCR). Более чувствительная технология, способная обнаружить очень низкий уровень мутантного аллеля. Применяется для уточнения диагноза и мониторинга минимальной остаточной болезни.
3. Пиросеквенирование и секвенирование по Сэнгеру. Используются для подтверждения мутации, но обладают меньшей чувствительностью по сравнению с ПЦР.
4. NGS (секвенирование нового поколения). Позволяет одновременно исследовать несколько генов и выявлять различные мутации, включая D816V. Метод информативен, но более сложен и дорогостоящий.

В чём отличие качественного и количественного анализа мутации KIT D816V?

Качественный анализ выявляет только наличие или отсутствие самой мутации в образце, то есть результат «положительный» или «отрицательный». Этот метод используется для первичной диагностики и подтверждения наличия мутации. Количественный анализ (например, ASO-qPCR) определяет, какой процент клеток содержит мутацию, то есть измеряет уровень мутантного аллеля в образце. Это важно для оценки тяжести заболевания, прогноза и контроля эффективности терапии, так как количество мутантных клеток коррелирует с активностью процесса и ответом на лечение.

Каково клиническое значение обнаружения мутации D816V при системном мастоцитозе?

Эта мутация является основным молекулярным маркером заболевания: она выявляется у подавляющего большинства пациентов с системным мастоцитозом и включена в диагностические критерии ВОЗ. Наличие D816V подтверждает клональную природу процесса, то есть то, что рост и накопление тучных клеток связаны с генетическим изменением.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Меликян А.Л., Суборцева И.Н., Шуваев В.А. и др. Национальные клинические рекомендации по диагностике и лечению мастоцитоза. Гематология и трансфузиология. 2021;66(2):280-311
2. Chatterjee A, Ghosh J, Kapur R. Mastocytosis: a mutated KIT receptor induced myeloproliferative disorder. Oncotarget. 2015 Jul 30
3. Jara-Acevedo, M., Teodosio, C., Sanchez-Muñoz, L. et al. Detection of the KIT D816V mutation in peripheral blood of systemic mastocytosis: diagnostic implications. Mod Pathol 28, 1138–1149 (2015).
4. Tan A, Westerman D, McArthur GA, Lynch K, Waring P, Dobrovic A. Sensitive detection of KIT D816V in patients with mastocytosis. Clin Chem. 2006 Dec;52(12):2250-7.
5. Рукша Т. Г., Сергеева Е. Ю., Фефелова Ю. А., Хоржевский В. А. Значение мутаций гена C-KIT в диагностике и прогнозе течения злокачественных опухолей // Архив патологии. 2021. № 83(4). С. 61–68.