Химерный ген PML-RARA формируется в результате транслокации t(15;17)(q24;q21), которая характерна для острого промиелоцитарного лейкоза (ОПЛ) – редкой, но высоко агрессивной формы острого миелоидного лейкоза (ОМЛ). В норме ген RARA регулирует созревание миелоидных клеток в костном мозге, а PML участвует в контроле апоптоза и поддержании ядерной архитектуры. При слиянии этих генов образуется химерный транскрипт, который блокирует дифференцировку промиелоцитов, вызывая накопление незрелых клеток и развитие лейкоза.

PML-RARA представлен несколькими вариантами сплайсинга, известными как bcr1, bcr2 и bcr3, различающимися точкой слияния PML с RARA. Вариант bcr1 чаще встречается у взрослых, bcr3 – у молодых пациентов, тогда как bcr2 встречается реже и характеризуется промежуточными свойствами. Наличие конкретного варианта влияет не только на диагностику, но и на прогноз и реакцию на терапию.

Выявление и количественная оценка этих транскриптов имеют критическое значение: позволяют подтвердить диагноз ОПЛ, определить молекулярный подтип и контролировать эффективность терапии. Традиционная морфологическая диагностика недостаточна, поскольку клинические проявления ОПЛ часто сходны с другими формами лейкоза, а химерный ген PML-RARA является уникальным маркером, позволяющим проводить персонализированный мониторинг заболевания.

Для обнаружения транскриптов PML-RARA используется метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), который позволяет выявлять даже минимальное количество патологических клеток. Существуют два подхода: качественная ПЦР и количественная (qPCR) ПЦР. Качественная ПЦР позволяет подтвердить наличие химерного транскрипта и определить его вариант (bcr1, bcr2 или bcr3). Метод основан на амплификации специфических участков ДНК или РНК, уникальных для каждого варианта PML-RARA. Положительный результат подтверждает диагноз острого промиелоцитарного лейкоза, даже если в образце присутствует небольшое количество патологических клеток.

Количественная ПЦР измеряет уровень транскриптов PML-RARA, что критически важно для контроля течения заболевания и ответа на лечение. Регулярное измерение позволяет определить молекулярную ремиссию или выявить ранние признаки рецидива, задолго до клинических проявлений. Таким образом, сочетание качественной и количественной ПЦР обеспечивает точную диагностику, подтипирование и мониторинг ОПЛ на молекулярном уровне.

Показания для анализа качественная и количественная оценка bcr 1

• Подозрение на острый промиелоцитарный лейкоз (ОПЛ) по морфологическим и клиническим признакам.
• Подтверждение диагноза ОПЛ у пациентов с выявленной транслокацией t(15;17).
• Определение варианта транскрипта (bcr1, bcr2, bcr3) для уточнения молекулярного подтипа.
• Мониторинг ответа на лечение и достижение молекулярной ремиссии.
• Раннее выявление рецидива на молекулярном уровне до клинических проявлений.
• Оценка эффективности терапевтических протоколов, включая трансретиноевую кислоту и химиотерапию.
• Скрининг минимальной остаточной болезни (MRD) у пациентов в ремиссии.

Подготовка к исследованию

Специальной подготовки к анализу не требуется.

Нормы и расшифровка результатов

Отрицательный результат (не обнаружен транскрипт PML-RARA):

• В пробе не выявлены химерные транскрипты bcr1, bcr2 или bcr3.
• Указывает на отсутствие острого промиелоцитарного лейкоза или на молекулярную ремиссию при проведении мониторинга после лечения.

Важно учитывать качество материала и чувствительность метода – низкий уровень патологических клеток может быть не выявлен при некачественном образце.

Положительный результат (обнаружен транскрипт PML-RARA):

• Выявлен один из вариантов транскрипта: bcr1, bcr2 или bcr3.
• Подтверждает диагноз ОПЛ, требует немедленного обсуждения с гематологом и выбора терапии.

При количественной ПЦР фиксируется уровень транскрипта, выраженный в международных единицах (IU) или в отношении к контрольному гену.

Интерпретация количественной ПЦР (qPCR):

• Высокая молекулярная нагрузка: активное заболевание, необходимость интенсивной терапии.
• Снижение уровня транскрипта: положительный ответ на лечение, контроль ремиссии.
• Стабильный или растущий уровень: риск рецидива, требует корректировки терапии.

Как часто нужно сдавать анализ?

На этапе диагностики тест выполняется однократно для подтверждения ОПЛ и определения варианта транскрипта (bcr1, bcr2 или bcr3). Во время индукционной и поддерживающей терапии анализ обычно проводят каждые один-три месяца, чтобы оценить снижение молекулярной нагрузки и эффективность лечения. После достижения ремиссии для мониторинга минимальной остаточной болезни тестирование выполняется каждые три месяца в течение первых двух лет, а при стабильном отрицательном результате частоту можно уменьшить до одного раза в шесть месяцев. При подозрении на рецидив анализ проводится незамедлительно, независимо от планового графика.

Почему результаты разных лабораторий могут отличаться?

• Чувствительность метода – разные лаборатории используют системы с разной чувствительностью, способные обнаруживать разные минимальные уровни патологических клеток.
• Калибровка и контроль качества – лаборатории могут применять различные стандарты и контрольные образцы, что влияет на точность количественного измерения транскриптов.
• Обработка материала – качество извлеченной РНК, время и условия хранения образца могут изменить результаты.
• Программное обеспечение и расчётные алгоритмы – при количественной ПЦР лаборатории используют разные методы нормализации и расчёта уровня транскрипта относительно контрольного гена.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Клинические рекомендации: Острый промиелоцитарный лейкоз. 2020 г.
2. Lv L, Yang L, Cui H, Ma T. A complex translocation (1;17;15) with spliced short-type PML-RARA fusion transcripts in acute promyelocytic leukemia: A case report. Exp Ther Med. 2019 Feb;17(2):1360-1366. doi: 10.3892/etm.2018.7091. Epub 2018 Dec 13.
3. Ольховский И.А., Комина А.В., Столяр М.А., Горбенко А.С. Молекулярно-генетические нарушения при острых лейкозах как основа разработки диагностических тестов (обзор литературы). Лабораторная служба. 2020;9(4):26–45.
4. Wang ZY, Chen Z (2008) Acute promyelocytic leukemia: from highly fatal to highly curable. Blood 111:2505–2515